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蛋白酶k的作用主要是降解RNA酶

更新時(shí)間:2022-03-21點(diǎn)擊次數(shù):2160
  蛋白酶,顧名思義,降解蛋白的酶,是一種切割活性較廣的絲氨酸蛋白酶。它切割脂族氨基酸和芳香族氨基酸的羧基端肽鍵,用于生物樣品中蛋白質(zhì)的一般降解。在RNA提取中,蛋白酶k的作用主要是降解RNA酶,防止RNA的降解。
  蛋白酶K廣泛應(yīng)用于分子生物學(xué),藥理學(xué)等科研方面。一種非特異性、枯草桿菌蛋白酶相關(guān)的絲氨酸蛋白酶,具有很高的比活性。一般儲(chǔ)存在-20°C,避光防潮密閉干燥蛋白酶是所有能夠催化分解蛋白質(zhì)的酶類(lèi)的統(tǒng)稱
  蛋白酶k是一種枯草蛋白酶類(lèi)的高活性蛋白酶,從林伯氏白色念球菌中純化得到。該酶有兩個(gè)Ca2+結(jié)合位點(diǎn),它們離酶的活性中心有一定距離,與催化機(jī)理并無(wú)直接關(guān)系。然而,如果從該酶中除去Ca2+,由于出現(xiàn)遠(yuǎn)程的結(jié)構(gòu)變化,催化活性將喪失80%左右,但其剩余活性通常已足以降解在一般情況下污染酶制品的蛋白質(zhì)。所以,蛋白酶k消化過(guò)程中通常加入edta(以抑制依賴于mg2+的核酸酶的作用)。但是,如果要消化對(duì)蛋白酶k具有較強(qiáng)耐性的蛋白,如角蛋白一類(lèi),則可能需要使用含有1mmol/lCa2+而不含edta的緩沖液。在消化完畢后、純化核酸前要加入egt(ph8.0)至終濃度為2mmol/l,以鰲合Ca2+。

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